鄂马铃薯3号遗传转化体系的构建与表达

doi:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2022.09.032

湖北农业科学 ›› 2022, Vol. 61 ›› Issue (9): 162-167.doi: 10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2022.09.032

鄂马铃薯3号遗传转化体系的构建与表达

高志鹏¹, 杜玉萧², 冯霞², 余土元¹, 李亚男³, 陈大清¹

1.仲恺农业工程学院农业与生物学院,广州 510225;
2.长江大学生命科学学院,湖北荆州 434025;
3.长江大学发展规划处,湖北荆州 434023

收稿日期:2021-07-05 出版日期:2022-05-10 发布日期:2022-05-26
通讯作者: 陈大清（1962-）,男,教授,主要从事植物逆境生理、作物发育生物学研究,（电子信箱）daqingchen@vip.sina.com。
作者简介:高志鹏（1996-）,男,广东韶关人,在读硕士研究生,研究方向为作物栽培学与耕作学,（电话）13570789378（电子信箱）xiaogao514863@163.com。
基金资助:
国家自然科学基金项目（31560579）; 广东省科技计划项目（2015A030302081）; 广东省教育厅人才引进项目（粤财教2010343号）; 广东省技术质量监督局项目（粤财农[2017]66号）; 湖北省自然科学基金项目（2005ABA204）

Construction and expression of genetic transformation system of Hubei potato No.3

GAO Zhi-peng¹, DU Yu-xiao², FENG Xia², YU Tu-yuan¹, LI Ya-nan³, CHEN Da-qing¹

1. College of Agriculture & Biology, Zhongkai University of Agricultural and Engineering, Guangzhou 510225,China;
2. College of Life Sciences, Yangtze University, Jingzhou 434025, Hubei,China;
3. Development Planning Department, Yangtze University, Jingzhou 434023,Hubei,China

Received:2021-07-05 Online:2022-05-10 Published:2022-05-26

摘要/Abstract

摘要： 以鄂马铃薯（Solanum tuberosum L.）3号为试验材料,将含有来源于黄芪的硒代半胱氨酸甲基转移酶基因（AbSMT）的质粒pBinAr进行PCR扩增以及酶切连接构建重组转化子pBI121-AbSMT,运用农杆菌转化法,设置农杆菌菌液浓度梯度、侵染时间以及共培养时间组合进行遗传转化,并且通过PCR鉴定以及GUS组织化学染色进行基因表达验证。结果表明,筛选抗生素是50.00 mg/L的Kan,农杆菌菌液浓度为0.50（OD_{600 nm}）,侵染时间为8 min,共培养时间为3 d,能够实现鄂马铃薯3号高效遗传转化,同时成功构建了AbSMT基因转化的鄂马铃薯3号。

关键词: 硒代半胱氨酸甲基转移酶（AbSMT）, 马铃薯（Solanum tuberosum L.）, 遗传转化, 表达分析

Abstract: Using Hubei potato（Solanum tuberosum L.） No. 3 as the experimental material, PCR amplification was performed on the plasmid pBinAr containing selenocysteine methyltransferase gene （AbSMT） from Astragalus membranaceous. Then, the recombinant transmitter pBI121-AbSMT was constructed by enzyme digestion and ligation. The combination of Agrobacterium solution concentration gradient, infection time, and co-culture time was set for genetic transformation, and gene expression was verified by PCR identification and GUS histochemical staining. The results showed that the selected antibiotic was 50.00 mg/L Kan. Agrobacterium solution concentration was 0.50 （OD_{600 nm}）; The infection time was 8 min. Co-culture time of 3 d could realize the efficient genetic transformation of Hubei potato No. 3. At the same time, the AbSMT gene transformed Hubei potato No. 3 was successfully constructed.

Key words: A. bisulcatus selenocysteine methyltransferase, potato（Solanum tuberosum L.）, genetic transformation, expression analysis

中图分类号:

S532

高志鹏, 杜玉萧, 冯霞, 余土元, 李亚男, 陈大清. 鄂马铃薯3号遗传转化体系的构建与表达[J]. 湖北农业科学, 2022, 61(9): 162-167.

GAO Zhi-peng, DU Yu-xiao, FENG Xia, YU Tu-yuan, LI Ya-nan, CHEN Da-qing. Construction and expression of genetic transformation system of Hubei potato No.3[J]. HUBEI AGRICULTURAL SCIENCES, 2022, 61(9): 162-167.

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