猪CD150真核表达载体的构建及其在Marc-145细胞中的稳定表达

doi:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2021.05.029

湖北农业科学 ›› 2021, Vol. 60 ›› Issue (5): 149-151.doi: 10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2021.05.029

猪CD150真核表达载体的构建及其在Marc-145细胞中的稳定表达

张兰¹, 梁婉², 周丹娜², 杨克礼², 郭锐², 李鹏¹, 田永祥²

1.长江大学动物科学学院,湖北荆州 434025;
2.湖北省农业科学院畜牧兽医研究所,武汉 430064

收稿日期:2020-12-25 出版日期:2021-03-10 发布日期:2021-03-22
通讯作者: 李鹏,副教授,主要从事动物传染病研究及鸵鸟产业化研发,（电子信箱）lipeng@yangtzcn.edu.cn;共同田永祥,研究员,主要从事家畜疫病防控研究,（电子信箱）tyxanbit@163.com。
作者简介:张兰（1995-）,女,湖北黄冈人,在读硕士研究生,研究方向为动物疫病防控,（电话）13797374370（电子信箱）944215783@qq.com;
基金资助:
中国博士后基金面上项目（2019M652609）

Construction of pig CD150 eukaryotic expression vector and its stable expression in Marc-145 cells

ZHANG Lan¹, LIANG Wan², ZHOU Dan-na², YANG Ke-li², GUO Rui², LI Peng¹, TIAN Yong-xiang²

1. College of Animal Science, Yangtze University, Jingzhou 434025, Hubei,China;
2. Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine, Hubei Academy of Agricultural Sciences, Wuhan 430064,China

Received:2020-12-25 Online:2021-03-10 Published:2021-03-22

摘要/Abstract

摘要： 试验克隆获得了猪全长CD150基因序列,将其连接到真核表达载体pEGFP-N1上获得重组载体pEGFP-N1-CD150。通过测序、Western-blot、瞬时转染,确认了pEGFP-N1-CD150的表达效果。结果表明,pEGFP-N1-CD150载体测序结果与CD150基因序列比对率100%;Marc-145细胞密度在70%~80%时质粒转染效果最佳,24 h为转染高峰期,绿色荧光最强;Western-blot鉴定到分子质量约为80 kDa的蛋白,与预期大小符合,表明CD150蛋白成功表达。

关键词: 猪, 淋巴细胞刺激因子（CD150）, 真核表达

Abstract: The full-length porcine CD150 gene sequence was cloned and connected to the eukaryotic expression vector pEGFP-N1 to obtain the recombinant vector pEGFP-N1-CD150. The expression of pEGFP-N1-CD150 was confirmed by sequencing, Western blot and transient transfection. The results showed that the sequence comparison rate of pEGFP-N1-CD150 vector and CD150 gene sequence was 100%; when the density of Marc-145 cells was 70%~80%, the transfection peak was 24 h, and the green fluorescence was the strongest; the protein with molecular weight of about 80 kDa was identified by Western blot, which was consistent with the expected size, indicating that CD150 protein was successfully expressed.

Key words: porcine, CD150, eukaryotic expression

中图分类号:

S828
Q786

张兰, 梁婉, 周丹娜, 杨克礼, 郭锐, 李鹏, 田永祥. 猪CD150真核表达载体的构建及其在Marc-145细胞中的稳定表达[J]. 湖北农业科学, 2021, 60(5): 149-151.

ZHANG Lan, LIANG Wan, ZHOU Dan-na, YANG Ke-li, GUO Rui, LI Peng, TIAN Yong-xiang. Construction of pig CD150 eukaryotic expression vector and its stable expression in Marc-145 cells[J]. HUBEI AGRICULTURAL SCIENCES, 2021, 60(5): 149-151.

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猪CD150真核表达载体的构建及其在Marc-145细胞中的稳定表达

Construction of pig CD150 eukaryotic expression vector and its stable expression in Marc-145 cells

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