卵黄抗体五种提取工艺比较及初步应用

doi:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2020.15.021

湖北农业科学 ›› 2020, Vol. 59 ›› Issue (15): 108-113.doi: 10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2020.15.021

卵黄抗体五种提取工艺比较及初步应用

向冬梅^1,2, 易思宇^1,3, 唐青海¹, 吴思雯¹, 王姝姝¹, 李彦¹, 黎露¹, 韩涛涛¹

1.衡阳师范学院生命科学与环境学院/衡阳师范学院畜禽养殖生物工程技术研究所,湖南衡阳 421008;
2.青岛农业大学生命科学学院,山东青岛 266109;
3.广西大学动物科学技术学院,南宁 530004

收稿日期:2019-11-26 出版日期:2020-08-10 发布日期:2020-09-24
通讯作者: 唐青海（1982-）,男,湖南祁阳人,副教授,博士,主要从事动物传染病防治技术研究,（电话）13548504557（电子信箱）qinghaitang109@126.com。
作者简介:向冬梅（1997-）,女,湖南怀化人,在读硕士研究生,研究方向为蛋白互作,（电话）15115281997（电子信箱）2456685639@qq.com;共同第一作者,易思宇（1996-）,男,湖南怀化人,在读硕士研究生,研究方向为反刍动物营养,（电话）18997565306（电子信箱）1248725896@qq.com。
基金资助:
湖南省教育厅优秀青年项目（17B041）; 校企合作项目“仔猪腹泻性疾病卵黄抗体制剂的研制”（ZXXQ201701）、“仔猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎和致病性大肠杆菌三价抗体的研究”（18H03）; 衡阳师范学院青年英才支持计划专项（16D20）

Comparison and preliminary application of five extraction methods of egg yolk antibody

XIANG Dong-mei^1,2, YI Si-yu^1,3, TANG Qing-hai¹, WU Si-wen¹, WANG Shu-shu¹, LI Yan¹, LI Lu¹, HAN Tao-tao¹

1. College of Life Sciences and Environment/Institute of Bio-technology for Livestock, Hengyang Normal University, Hengyang 421008, Hunan, China;
2. College of Life Sciences, Qingdao Agricultural University, Qingdao 266109, Shandong, China;
3. College of Animal Science and Technology, Guangxi University, Nanning 530004, China

Received:2019-11-26 Online:2020-08-10 Published:2020-09-24

摘要/Abstract

摘要： 为了得到较优的卵黄抗体提取工艺,试验改良了辛酸法、水稀释法、氯仿法、硫酸铵沉淀法与聚乙二醇沉淀法5种提取方法。IPGT诱导表达重组猪致病性大肠杆菌（Escherichia coli）毒素STxB蛋白（rSTxB）,与佐剂71VG乳化制备免疫原免疫蛋鸡,利用改良的聚乙二醇沉淀法提取高免卵黄抗体,采用SDS-PAGE电泳检测抗体纯度,通过Western blot检测卵黄抗体和血清抗体效价。结果表明,辛酸法、水稀释法、氯仿法、硫酸铵沉淀法、聚乙二醇沉淀法提取效率分别为96.00、81.99、155.50、65.34、46.00 mg/mL,其中聚乙二醇沉淀法的提取纯度最高。重组STxB蛋白分子量大小约25 kDa,血清中抗体效价最高达到64 000倍,卵黄抗体最高稀释倍数为16 000倍。综合评估,聚乙二醇的提取法相对较优,且提取的卵黄抗体具有良好的免疫活性。

关键词: 卵黄抗体, 提取工艺, 聚乙二醇沉淀法, STxB蛋白, 佐剂

Abstract: In order to obtain a relatively good extraction process of egg yolk antibody, five methods including octanoic acid method, water dilution method, chloroform method, ammonium sulfate precipitation method and polyethylene glycol precipitation method were improved in this experiment. Expression of recombinant porcine pathogenic Escherichia coli toxin STxB（rSTxB） was induced by IPGT, and then the immunogen was prepared by emulsifying the rSTxB with the adjuvant 71VG, and the hens were immunized, IgY was extracted by modified polyethylene glycol method. The purity of the IgY antibody was detected by SDS-PAGE electrophoresis, and the immunoactivity and titers of yolk antibody and serum antibody titer were detected by Western blot. The results showed that the extraction efficiencies of octanoic acid method, water dilution method, chloroform method, ammonium sulfate precipitation method and polyethylene glycol precipitation method were 96.00,81.99,155.50,65.34,46.00 mg/mL,respectively, and the extraction purity of polyethylene glycol precipitation was the highest. The molecular weight of rSTxB protein was about 25 kDa, the antibody titer in serum was up to 64 000 times, and the highest dilution factor of yolk antibody was 16 000 times. For the comprehensive evaluation, the extraction method of polyethylene glycol precipitation was relatively superior, and the extracted yolk antibody showed good immunological activity.

Key words: egg yolk antibody, extraction process, polyethylene glycol precipitation, STxB protein, adjuvant

中图分类号:

S852.4⁺3

向冬梅, 易思宇, 唐青海, 吴思雯, 王姝姝, 李彦, 黎露, 韩涛涛. 卵黄抗体五种提取工艺比较及初步应用[J]. 湖北农业科学, 2020, 59(15): 108-113.

XIANG Dong-mei, YI Si-yu, TANG Qing-hai, WU Si-wen, WANG Shu-shu, LI Yan, LI Lu, HAN Tao-tao. Comparison and preliminary application of five extraction methods of egg yolk antibody[J]. HUBEI AGRICULTURAL SCIENCES, 2020, 59(15): 108-113.

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Comparison and preliminary application of five extraction methods of egg yolk antibody

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