马流感H3N8实时荧光RT-PCR检测方法的建立

doi:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.17.034

湖北农业科学 ›› 2019, Vol. 58 ›› Issue (17): 129-131.doi: 10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.17.034

马流感H3N8实时荧光RT-PCR检测方法的建立

林志雄^1,2, 鱼海琼^1,2, 王莹^1,2, 翟建新³, 张利³

1.广东省动植物与食品进出口技术措施研究重点实验室,广州 510623;
2.广州海关检验检疫技术中心,广州 510623;
3.深圳澳东检验检测科技有限公司,广东深圳 518000

收稿日期:2019-04-30 发布日期:2019-11-14
作者简介:林志雄（1964-）,男,广东佛山人,研究员,硕士,主要从事进出境动物检疫工作,（电话）020-38290946（电子信箱）linzhixiong@189.com。
基金资助:
开放基金课题（IQTC201801; 2012IK006）

Establishment of RT-PCR method for the detection of equine influenza virus H3N8

LIN Zhi-xiong^1,2, YU Hai-qiong^1,2, WANG Ying^1,2, ZHAI Jian-xin³, ZHANG Li³

1.Guangdong Provincial Key Laboratory of Import and Export Technical Measures of Animal,Plant and Food,Guangzhou 510623,China;
2.Guangzhou Custom Inspection and Quarantine Technical Center,Guangzhou 510623,China;
3.Shenzhen Aodong Inspection & Testing Technology Co.,Ltd.,Shenzhen 518000,Guandong,China;

Received:2019-04-30 Published:2019-11-14

摘要/Abstract

摘要： 通过比对NCBI上马流感H3N8序列,针对HA和NA基因序列高度保守区域设计了特异性强的引物与探针,优化了程序,建立了以实时荧光RT-PCR技术检测马流感H3N8的方法。结果表明,该方法最小检测浓度为3.36×10² copies/μL;特异性强,仅针对马流感H3N8样本检出为阳性;对58份临床样本的检测,阳性检出率为12.07%,是常规PCR的2.3倍,且与病毒分离100%符合。

关键词: 马流感病毒, H3N8亚型, 实时荧光RT-PCR

Abstract: By comparing the H3N8 sequence of Equine influenza virus （EIV） from NCBI, highly specific primers and probes were designed for the highly conserved region of HA and NA gene sequences, and the program was optimized to establish a RT-PCR method for the detection of EIV H3N8. The results showed that the minimum detection concentration was 3.36×10² copies/μL. With high specificity, only EIV H3N8 samples were positive. The positive detection rate of 58 clinical samples was 12.07%, 2.3 times that of conventional PCR, and 100% consistent with virus isolation.

Key words: Equine influenza virus（EIV）, H3N8 subtype, RT-PCR

中图分类号:

Q789
S852.65

林志雄, 鱼海琼, 王莹, 翟建新, 张利. 马流感H3N8实时荧光RT-PCR检测方法的建立[J]. 湖北农业科学, 2019, 58(17): 129-131.

LIN Zhi-xiong, YU Hai-qiong, WANG Ying, ZHAI Jian-xin, ZHANG Li. Establishment of RT-PCR method for the detection of equine influenza virus H3N8[J]. HUBEI AGRICULTURAL SCIENCES, 2019, 58(17): 129-131.

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马流感H3N8实时荧光RT-PCR检测方法的建立

Establishment of RT-PCR method for the detection of equine influenza virus H3N8

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