桑椹缩小型菌核病菌丝裂原活化蛋白激酶基因Mmk1的克隆与分析

doi:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2018.23.034

湖北农业科学 ›› 2018, Vol. 57 ›› Issue (23): 143-147.doi: 10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2018.23.034

桑椹缩小型菌核病菌丝裂原活化蛋白激酶基因Mmk1的克隆与分析

朱志贤, 于翠, 李勇, 莫荣利, 邓文, 胡兴明

湖北省农业科学院经济作物研究所,武汉 430064

收稿日期:2018-08-14 出版日期:2018-12-10 发布日期:2019-12-18
通讯作者: 胡兴明（1963-）,男,研究员,硕士生导师,博士,（电话）13607121598（电子信箱）13607121598@163.com。
作者简介:朱志贤（1987-）,女,湖北武穴人,助理研究员,博士,主要从事桑树病虫害研究,（电话）13720239677（电子信箱）zhuzhixian1987125@163.com
基金资助:
国家现代农业产业技术体系建设专项（CARS-22-ZJ0304）; 湖北省农业科学院青年基金项目（2017NKYJJ08）; 湖北省自然科学基金青年基金项目（2018CFB283）

Cloning and Analysis of Mitogen-Activated Protein Kinases Gene Mmk1 in Scleromitrula shiraiana

ZHU Zhi-xian, YU Cui, LI Yong, MO Rong-li, DENG Wen, HU Xing-ming

Institute of Economic Crops,Hubei Academy of Agricultural Sciences,Wuhan 430064,China

Received:2018-08-14 Online:2018-12-10 Published:2019-12-18

摘要/Abstract

摘要： 根据核盘菌菌核形成相关丝裂原活化蛋白激酶Smk1的氨基酸序列设计出简并引物进行RT-PCR,克隆获得长度为856 bp的桑椹缩小型菌核病菌丝裂原活化蛋白激酶基因Mmk1的cDNA片段。将测序结果与GenBank数据库进行Blastx比对后,发现克隆片段所编码的氨基酸序列与其他真菌的MAPK氨基酸序列具有较高的同源性。实时荧光定量PCR分析表明,该基因的表达量随着菌株的生长而减少。Mmk1基因的分子克隆为进一步研究其在菌核形成中的作用奠定了基础。

关键词: 桑椹缩小型菌核病菌, 简并引物, 丝裂原活化蛋白激酶

Abstract: The degenerate primers were designed according to the mitogen-activated protein kinases Smk1 from Sclerotinia sclerotiorum. Using the degenerate primers to carry out RT-PCR, length of 856 bp cDNA fragments of mitogen-activated protein kinases Mmk1 of S. shiraiana were cloned. Sequencing results were queried for similarity against the GenBank using Blastx, and found that the amino acids sequences encoded by cloned fragments had high homology with MAPK amino acid sequences of other fungi. Real time quantitative PCR analysis revealed that expression of the gene decreased with the growth of the strain. Molecular characterization of Mmk1 will be useful for the further functional determination of the gene involving in the development of sclerotium.

Key words: Scleromitrula shiraiana, degenerate primers, mitogen-activated protein kinases

中图分类号:

Q78
S888.71

朱志贤, 于翠, 李勇, 莫荣利, 邓文, 胡兴明. 桑椹缩小型菌核病菌丝裂原活化蛋白激酶基因Mmk1的克隆与分析[J]. 湖北农业科学, 2018, 57(23): 143-147.

ZHU Zhi-xian, YU Cui, LI Yong, MO Rong-li, DENG Wen, HU Xing-ming. Cloning and Analysis of Mitogen-Activated Protein Kinases Gene Mmk1 in Scleromitrula shiraiana[J]. HUBEI AGRICULTURAL SCIENCES, 2018, 57(23): 143-147.

参考文献

[1] 操红缨. 桑椹研究进展[J].时珍国医国药,1999,10(8):626-628.
[2] KIM S B,CHANG B Y,JO Y H,et al.Macrophage activating activity of pyrrole alkaloids from Morus alba fruits[J].Journal of Ethnopharmacology,2013,145(1):393-396.
[3] 李玉峰. 湖州市桑果产业的现状与发展对策研究[D].杭州:浙江大学,2012.
[4] 邹宇晓,廖森泰,肖更生,等.蚕桑资源多元化开发利用新技术研究进展[J].蚕业科学,2016(4):561-569.
[5] 蒯元璋,吴福安.桑椹菌核病病原及病害防治技术综述[J].蚕业科学,2012,38(6):1099-1104.
[6] HONG S K,WAN G K,SUNG G B,et al.Identification and distribution of two fungal species causing sclerotial disease on mulberry fruits in korea[J].Mycobiology,2007,35(2):87-90.
[7] 吕蕊花,赵爱春,余建,等.桑椹肥大性菌核病病原菌生物学特性及流行性[J].微生物学报,2017,57(3):388-398.
[8] CHEN C B,HAREL A R,YARDEN O,et al.MAPK regulation of sclerotial development in Sclerotinia sclerotiorum is linked with pH and cAMP sensing[J].Mol Plant Microbe Interact,2004, 17(4):404.
[9] 刘蒙蒙,宋超,邢咏梅,等.猪苓菌丝形成菌核的MAPK基因克隆及表达分析[J].微生物学通报,2015,42(12):2345-2350.
[10] GOUGH N R. Focus issue:Recruiting players for a game of ERK[J].Science Signaling,2011,4(196):eg9.
[11] 苏正川. 桑葚缩小型菌核病病原学及其分子检测体系[D].重庆:西南大学,2015.
[12] 郑章云,杨义,任杰群,等.2种木霉菌制剂对桑椹菌核病的田间防治试验[J].蚕业科学,2016(1):168-170.
[13] SULTANA R,KIM K.Bacillus thuringiensis C25 suppresses popcorn disease caused by Ciboria shiraiana in mulberry (Morus australis L.)[J].Biocontrol Science and Technology,2016, 26(2):145-162.
[14] THOMPSON J D,GIBSON T J,PLEWNIAK F,et al.The CLUSTAL_X windows interface:Flexible strategies for multiple sequence alignment aided by quality analysis tools[J].Nucleic Acids Research,1997,25(25):4876-4882.
[15] 夏瑞,陆旺金,李建国,等.简并引物的程序化设计与荔枝HMGR基因片段的克隆[J].果树学报,2006,23(6):903-906.
[16] 刘荣. 核盘菌两个新型RNA病毒基因组的分子生物学特性研究[D].武汉:华中农业大学,2015.
[17] 李运合,孙光明.利用CODEHOP和iCODEHOP设计简并引物克隆芒果LAX基因家族片段[J].热带作物学报,2011,32(12):2278-2282.
[18] 魏景超. 真菌鉴定手册[M].上海:上海科学技术出版社,1979.
[19] 王爱印. 桑椹菌核病病原菌的分离、鉴定及其拮抗性桑树内生菌的研究[D].重庆:西南大学,2016.

桑椹缩小型菌核病菌丝裂原活化蛋白激酶基因Mmk1的克隆与分析

Cloning and Analysis of Mitogen-Activated Protein Kinases Gene Mmk1 in Scleromitrula shiraiana

PDF

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价

[1]	陈镇, 何晓莹, 王敬乔, 李根泽, 束正齐, 赵凯琴, 程小毛, 俎峰. 甘蓝型油菜BnFAD2基因的生物信息学分析[J]. 湖北农业科学, 2021, 60(11): 134-140.
[2]	倪婧, 谢道燕, 江秀均, 杨振国, 柴建萍. 朱砂叶螨各发育阶段内参基因评估及筛选[J]. 湖北农业科学, 2021, 60(11): 141-145.
[3]	张兰, 梁婉, 周丹娜, 杨克礼, 郭锐, 李鹏, 田永祥. 猪CD150真核表达载体的构建及其在Marc-145细胞中的稳定表达[J]. 湖北农业科学, 2021, 60(5): 149-151.
[4]	郝紫微, 戴雨沁, 张绍铃, 王鹏. 发根农杆菌介导的杜梨毛状根遗传转化方法[J]. 湖北农业科学, 2021, 60(1): 151-154.
[5]	肖红卫, 毕延震. 小分子化合物靶向DNA连接酶IV提高CRISPR/Cas9基因编辑效率的研究进展[J]. 湖北农业科学, 2020, 59(22): 13-19.
[6]	孟刚, 彭云武, 王瑞娴, 楚渠, 梁嘉俊, 凌君. 野桑蚕Hippo通路核心基因的鉴定与序列比较分析[J]. 湖北农业科学, 2020, 59(13): 149-153.
[7]	曹旗, 潘悦, 郑宇, 王菡, 任洪林, 胡盼, 李岩松, 周玉, 柳增善, 卢士英. 小鼠CD40胞外段的原核表达及多克隆抗体的制备[J]. 湖北农业科学, 2020, 59(6): 130-134.
[8]	宋嘉宾, 端木德强. 百脉根中Lj5NG4与结瘤因子受体LjNFR1互作调控根瘤菌侵染[J]. 湖北农业科学, 2020, 59(5): 145-151.
[9]	王义杰, 张绍杰, 赖艳, 胡永峰. 水稻糖代谢相关酶和糖类转运蛋白编码基因的鉴定和表达分析[J]. 湖北农业科学, 2019, 58(22): 185-193.
[10]	王崇, 王连军, 雷剑, 苏文瑾, 柴沙沙, 杨新笋, 张文英. 甘薯抗病相关基因TAO1-like的TRAP分析[J]. 湖北农业科学, 2019, 58(18): 152-155.
[11]	马志禹, 张莹, 陈风雷, 杨盛, 乔文娜, 胡佳慧, 张金龙, 雷治海. 热应激对兔下丘脑-垂体-睾丸轴NMB及其受体基因表达和睾酮分泌的影响[J]. 湖北农业科学, 2019, 58(12): 141-146.
[12]	刘连妹, 屈海泳, 安爽, 郝传浩, 任翠萍. VB6代谢途径相关基因在苹果苦痘病果实中的表达[J]. 湖北农业科学, 2019, 58(12): 147-151.
[13]	许文豪, 周婉, 臧敦安, 巩雪洁, 刘庆华, 于孟飞, 薛璐, 彭勇波. 基于CRISPR/Cas9构建基因编辑小鼠sgRNA有效性验证研究[J]. 湖北农业科学, 2018, 57(24): 156-159.
[14]	向极钎, 王晓辉, 殷红清, 万海英, 李亚杰, 杨永康, 丛欣. 湘鄂不同区域堇叶碎米荠居群间RAPD分析[J]. 湖北农业科学, 2018, 57(24): 160-163.
[15]	赵彦敏, 瓮巧云. 拟南芥AT4G32010基因缺失突变体对非生物胁迫的响应[J]. 湖北农业科学, 2018, 57(13): 94-97.